1. Tóm tắt
Rau mùi là một loại cây thuốc được sử dụng rộng rãi trong điều trị sỏi tiết niệu. Nghiên cứu hiện tại nhằm đánh giá tác dụng chống sỏi tiết niệu của rau mùi và cơ chế của nó. 24 con chuột được chia thành bốn nhóm: nhóm A (đối chứng âm tính), nhóm B (đối chứng dương tính), nhóm C ( nhóm cystone®) và nhóm D (nhóm rau mùi). Nhóm B được điều trị bằng EG và Amoni clorua (AC). Nhóm C được điều trị bằng B cộng với cystone ® và nhóm D được điều trị bằng B cộng với rau mùi. Thời gian thử nghiệm là 15 ngày. Các mẫu nước tiểu được phân tích vào ngày 0 và ngày 15. Thận của những con chuột từ tất cả các nhóm được lấy ra và được kiểm tra về mặt mô bệnh học. Thận của nhóm được điều trị bằng rau mùi dường như hầu hết không có sỏi (ít CaOx hơn) thậm chí còn tốt hơn nhóm được điều trị bằng cystone. Tinh thể CaOx thấp hơn đáng kể cả trong các lát cắt mô học và trong các mẫu nước tiểu ở nhóm được điều trị bằng rau mùi. Chúng tôi tiếp tục nghiên cứu cơ chế của rau mùi bằng cách thêm 6 con chuột khác. Những con chuột sau chỉ được điều trị bằng rau mùi sau thời gian thích nghi. Chúng tôi thấy lượng nước tiểu và độ pH tăng đáng kể ở chuột được điều trị bằng rau mùi tây so với nhóm đối chứng âm tính. Chúng tôi kết luận rằng rau mùi tây có tác dụng như thuốc chống sỏi niệu thông qua việc giảm bài tiết canxi qua nước tiểu, tăng độ pH của nước tiểu, lợi tiểu, giảm bài tiết protein qua nước tiểu và hoạt động bảo vệ thận của nó. Chúng tôi khuyến cáo sử dụng nó ở dạng dược phẩm vì nó an toàn và hiệu quả như một phương thuốc chống sỏi niệu.
2. Giới thiệu
Sỏi thận (sỏi thận, sỏi tiết niệu, sỏi tiết niệu và sỏi thận) ảnh hưởng đến rất nhiều bệnh nhân trên toàn thế giới. Sỏi tiết niệu đã hành hạ loài người từ thời cổ đại và có thể kéo dài với những hậu quả nghiêm trọng trong suốt cuộc đời của bệnh nhân. Đây là một căn bệnh tái phát với tỷ lệ tái phát là 50% trong 5-10 năm và 75% trong 20 năm. Nam giới bị ảnh hưởng nhiều hơn nữ giới với tỷ lệ tái phát cao hơn (70-80% ở nam giới và 47-60% ở nữ giới). Canxi oxalat (CaOx) chiếm 80% sỏi thận, 10% struvite, 9% axit uric và 1% còn lại bao gồm cystine hoặc urat axit amoni.
Các cơ chế liên quan đến sự hình thành sỏi là: nước tiểu quá bão hòa, thay đổi độ pH của nước tiểu, thay đổi thành phần nước tiểu và hình thành hạt nhân.
Điều trị sỏi tiết niệu khác nhau, từ phẫu thuật cắt bỏ, tán sỏi ngoài cơ thể bằng sóng xung kích (ESWL) đến điều trị y tế bằng nhiều loại thuốc tổng hợp khác nhau. Liệu pháp thực vật là một phương pháp điều trị sỏi tiết niệu thay thế khác bao gồm rau mùi tây.
Rau mùi tây, họ Umbelliferae , được biết đến tại địa phương là Baqdunis , đã được sử dụng làm thuốc ở nhiều nước châu Âu, Địa Trung Hải và châu Á. Đây là một loại thảo dược được sử dụng trên toàn thế giới vì có hoạt tính chống oxy hóa, chống viêm, chống phù nề, hạ huyết áp, chống tiểu đường, kháng khuẩn, nhuận tràng ở đường tiêu hóa, chống oxy hóa, cân bằng hoạt động của enzyme, tăng glutathione trong thận và tái tạo mô thận sau khi bị độc tính với thận.
Gumaih et al. đã tìm thấy sự giảm đáng kể trong urê huyết thanh, creatinine, axit uric và chất điện giải và kết luận về tác dụng bảo vệ thận của rau mùi tây trên chuột được điều trị bằng EG. Họ cũng tìm thấy sự giảm đáng kể canxi và protein trong nước tiểu và kết luận về tác dụng chống sỏi niệu của rau mùi tây.
Nghiên cứu hiện tại nhằm mục đích điều tra các tác dụng khác mà cây mùi tây chống lại bệnh sỏi tiết niệu để hoàn thiện bức tranh đầy đủ về cơ chế của nó. Cystone ® (một loại thuốc thảo dược thông thường được sử dụng cho bệnh sỏi tiết niệu) cũng được sử dụng để so sánh.
3. Vật liệu và phương pháp
Động vật thí nghiệm
Chuột bạch tạng đực nặng từ 150 đến 200 g được sử dụng trong nghiên cứu này. Toàn bộ thí nghiệm được thực hiện trong cùng điều kiện môi trường ở nhiệt độ phòng. Động vật ở lại bảy ngày trước khi thí nghiệm như thời gian thích nghi và lớp lót chuồng thay đổi sau mỗi 48 giờ.
Chuẩn bị chiết xuất
Hạt mùi tây được thu thập từ chợ địa phương. Hạt khô được nghiền thành bột mịn bằng máy xay và bảo quản trong hộp kín. Khoảng 750 ml etanol 70% được thêm vào 100g bột và giữ trên máy lắc cơ học (máy lắc từ) ở 55°C trong 72 giờ, được lọc và giữ trong tủ ấm ở 37°C trong 36 giờ. Chiết xuất cô đặc được bảo quản ở trạng thái khô ở -20°C trong tủ đông sâu.
Thiết kế thử nghiệm
Cảm ứng đá
Ethylene glycol (EG) cộng với amoni clorua (AC) được sử dụng để gây sỏi tiết niệu. EG (0,75% v/v) và AC (1% w/v) trong nước uống tự do trong 15 ngày.
Chuẩn bị liều lượng
Chiết xuất ethanol của rau mùi tây được hòa tan trong nước cất (DW) với liều lượng 500 mg/kg trọng lượng cơ thể chuột sau đó lắc cho đến khi tan hoàn toàn, trong khi thuốc cystone được hòa tan trong DW với liều lượng 500 mg/kg trọng lượng cơ thể chuột bằng ống thông dạ dày.
Hai mươi bốn con chuột đực được chia ngẫu nhiên thành bốn nhóm, mỗi nhóm sáu con. Nhóm A: đối chứng âm tính, được cho ăn chế độ ăn bình thường. Nhóm B: ăn chế độ ăn bình thường với EG (0,75%) và AC (1%) trong 15 ngày và đóng vai trò là đối chứng dương tính. Nhóm C: dùng các chất giống như nhóm B với 500 mg/kg cystone trong 15 ngày. Nhóm D: dùng các chất giống như nhóm B với 500 mg/kg rau mùi tây trong 15 ngày.
Đánh giá hoạt động chống sỏi niệu
Thu thập và phân tích nước tiểu
Tất cả các con vật đều được nhịn ăn qua đêm sau đó các mẫu nước tiểu được thu thập từ mỗi con chuột chỉ vào ngày đầu tiên và ngày cuối cùng trước và sau khi điều trị. Những con vật này được nhốt trong các lồng riêng biệt và nước tiểu được thu thập vào buổi sáng mà không có bất kỳ chất bảo quản nào để phân tích tinh thể niệu. Loại và số lượng tinh thể được xác định và đếm bằng kính hiển vi quang học (Leica Galen III, Hoa Kỳ). Tinh thể niệu được tính điểm như sau: “0” không có tinh thể; “1” 1 đến 5 tinh thể trên mỗi trường có độ phóng đại cao (×400); “2” 6 đến 20 tinh thể/HPF; và “3”>20 tinh thể/HPF.
Nghiên cứu mô bệnh học
Vào cuối thí nghiệm, các con vật bị giết bằng cách chặt đầu cổ. Bụng được rạch và mở ra để lấy cả hai quả thận ra khỏi mỗi con vật, làm sạch các mô ngoại lai bằng dung dịch muối sinh lý lạnh như đá. Thận được cố định trong formalin 10% và xử lý qua loạt cồn phân loại và xylen. Sau đó, các mẫu vật được nhúng trong parafin, cắt lát ở kích thước 5 μm và nhuộm bằng hematoxylin và eosin để kiểm tra mô bệnh học dưới kính hiển vi quang học (Leica Galen III America). Số lượng tinh thể lắng đọng được đếm trên 10 HPF. Số lượng tinh thể trung bình trên mỗi trường được lấy cho mỗi quả thận được kiểm tra. Mật độ tinh thể được ghi nhận là: “0” không lắng đọng tinh thể; “1” 1-2 tinh thể/HPF; “2” 3-4 tinh thể/HPF; và “3”> 4 tinh thể/HPF. Ảnh được chụp bằng máy ảnh kỹ thuật số (canon, 12,1 mega pixel, Nhật Bản).
Đánh giá hoạt tính lợi tiểu của rau mùi tây và tác dụng của nó lên độ pH nước tiểu
Sáu con chuột khác được sử dụng để xác định tác dụng của rau mùi tây đối với thể tích nước tiểu và độ pH.
Đánh giá lượng nước tiểu
Sáu mức này được áp dụng trong 7 ngày, nhốt riêng từng con trong lồng và được phép tiếp cận thức ăn và nước uống miễn phí. Sau đó, nước tiểu được thu thập trong vòng 24 giờ và thể tích nước tiểu được đo. Sau thời gian này, những con chuột tương tự được cho uống chiết xuất ethanol của rau mùi tây trong bảy ngày nữa, trong đó nước tiểu được thu thập sau mỗi 24 giờ và thể tích nước tiểu được đo. Do đó, mọi con vật đều đóng vai trò là động vật đối chứng và được điều trị trong cùng một thời điểm.
Đánh giá độ pH của nước tiểu
Các mẫu nước tiểu tươi từ sáu con chuột được đo bằng giấy pH chuẩn (Cybow™, DFI Co., Ltd. Hàn Quốc). Chúng tôi đo pH nước tiểu vào buổi sáng và buổi chiều cho mỗi con chuột để biết tác dụng của rau mùi tây đối với pH nước tiểu.
Phân tích thống kê
Dữ liệu thu được từ các tham số khác nhau được đánh giá thống kê bằng phần mềm SPSS (Phiên bản 16). Phân tích phương sai một chiều (ANOVA) và Chi bình phương được áp dụng. Giá trị trung bình ± SEM được tính cho từng tham số.
4. Kết quả
Canxi oxalat trong nước tiểu của các nhóm khác nhau
Mật độ tinh thể CaOx giảm đáng kể ở nhóm D so với nhóm B và C. Không thấy giảm đáng kể ở nhóm C so với nhóm B.
Mật độ canxi oxalat trong mô thận của các nhóm khác nhau
Canxi oxalat có nhiều ở chuột được điều trị bằng EG/AC (nhóm B) và có kích thước lớn hơn. Ngoài ra, chúng có trong các ống thận bị tổn thương ống thận rõ ràng và xâm lấn vào mô kẽ. Số lượng và kích thước tinh thể giảm đáng kể ở rau mùi tây (nhóm D) so với nhóm B hoặc C. Ngoài ra, tính toàn vẹn của mô thận tốt hơn ở nhóm (D) so với nhóm đối chứng dương tính và nhóm sỏi thận.
Mối quan hệ giữa mật độ canxi oxalat trong mô thận và trong nước tiểu
Mật độ tinh thể trong cả mô thận và nước tiểu có mối quan hệ tỷ lệ thuận. Giảm đáng kể mật độ tinh thể trong nhóm rau mùi tây ở cả mô thận và nước tiểu so với nhóm B&C.
Lượng nước uống vào và lượng nước tiểu
Lượng nước uống trung bình và lượng nước tiểu trung bình tăng đáng kể ở nhóm ăn rau mùi tây (P < 0,0001).
Độ pH nước tiểu vào buổi sáng và buổi chiều
Có sự gia tăng đáng kể độ pH trong nước tiểu ở những con chuột ăn rau mùi tây so với nhóm không ăn rau mùi tây trong cả mẫu nước tiểu buổi sáng và buổi chiều (P < 0,001 và p < 0,0003 tương ứng).
(Nguồn: Dịch từ PubMed)